Avaliação da expressão dos antígenos Ki-67 e CD71 em células blásticas CD34 positivas nas leucemias agudas / Determination of Ki-67 and CD71 antigens expression on CD34-positive blastic cells in acute leukaemias

Foram avaliadas a expressão de marcadores Ki-67 e CD71 nas células imaturas CD34+ em pacientes com leucemias agudas (LA) e a associação entre esses marcadores. Foram selecionados 54 pacientes com LA atendidos no Centro Oncológico de Referência do estado do Maranhão, de dezembro/2008 a novembro/2009. A expressão de Ki-67 e CD71 foi determinada por citometria de fluxo, em células positivas para o marcador de células imaturas CD34. Dos 54 pacientes, 34 (63,0%) eram portadores de leucemias linfoides agudas (LLA), destes, 73,5% eram do tipo B (LLAB) e 26,5% do tipo T (LLAT). A maior expressão de Ki-67 em medula óssea (MO) e sangue periférico (SP) foi detectada na LLAB; e, nas amostras de MO, o CD71 apresentou maior expressão na LLAT. Em SP, houve maior expressão do CD71nas LMA. Houve associação entre o Ki-67 e o CD71 em MO na LMA e, em SP, na LLAB. A expressão do Ki-67 nas leucemias agudas não diferiu nas amostras estudadas; contudo, diferenças na expressão do CD71 foram maiores na LLAT em MO e em SP na LMA. Esses achados serão úteis no diagnóstico e nomonitoramento de pacientes leucêmicos quanto à agressividade neoplásica pela detecção dos marcadoresde proliferação celular.

Immunophenotypic characterization of acute leukemia at a public oncology reference center in Maranhão, northeastern Brazil / Caracterização imunofenotípica das leucemias agudas em um centro oncológico de referência público no Maranhão, Nordeste do Brasil

CONTEXT AND OBJECTIVES: The incidence of acute leukemia (AL) subtypes varies according to geographical distribution. The aim here was to determine the incidence of morphological and immunophenotypic AL subtypes in the state of Maranhão, Brazil, and to correlate the expression of aberrant phenotypes in children with acute lymphoblastic leukemia (ALL) with prognostic factors. DESIGN AND SETTING: Single prospective cohort study at a public oncology reference center in Maranhão. METHODS: Seventy AL cases were diagnosed between September 2008 and January 2010. For the diagnosis, complete blood cell counts, myelograms (at diagnosis and at the end of the induction phase), cytochemical analysis and immunophenotyping were performed. RESULTS: Among adult patients (n = 22), the incidence of AL types was: ALL (22.7 percent) and acute myeloid leukemia (AML) (77.3 percent). The subtype AML M0 occurred most frequently (29.4 percent). In children (n = 48), the types were: AML (18.7 percent), most frequently subtype AML M4 (33.4 percent); biphenotypic acute leukemia (BAL) (4.2 percent); and ALL (77.1 percent), including the subtypes B-ALL (72.9 percent) and T-ALL (27.1 percent). Among the children with ALL, there were no statistically significant differences between patients with and without aberrant phenotypes, in relation to hematological parameters and treatment response. CONCLUSION: This work demonstrates that the frequencies of AML M0 cases among adults and T-ALL cases among children in Maranhão were high. This suggests that there may be differences in AML subtype incidence, as seen with ALL subtypes, in different regions of Brazil. No association was found between the expression of aberrant phenotypes and prognostic factors, in children with ALL.

CONTEXTO E OBJETIVOS: A incidência dos subtipos de leucemias agudas (LA) tem mostrado variações em relação à distribuição geográfica. Objetivou-se determinar a incidência dos subtipos morfológicos e imunofenotípicos de LA no estado do Maranhão, Brasil, e relacionar a expressão de fenótipos aberrantes em crianças com leucemia linfoblástica aguda (LLA) com fatores prognósticos. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo de coorte único prospectivo em um centro oncológico de referência público no Maranhão. MÉTODOS: Diagnosticaram-se 70 casos de LA no período de setembro de 2008 a janeiro de 2010. No diagnóstico, realizaram-se hemogramas, mielogramas (no diagnóstico e ao final da fase de indução), citoquímica e imunofenotipagem. RESULTADOS: Nos pacientes adultos (n = 22), as incidências dos tipos de LA foram: LLA (22,7 por cento) e leucemia mieloide aguda (LMA) (77,3 por cento), sendo o subtipo LMA M0 mais frequente (29,4 por cento). Em crianças (n = 48): LMA (18,7 por cento), subtipo LMA M4 mais frequente (33,4 por cento), leucemia bifenotípica aguda (BAL) (4,2 por cento) e LLA (77,1 por cento), sendo os subtipos LLA-B (72,9 por cento) e LLA-T (27,1 por cento). Na LLA, em crianças, não se encontrou diferença estatisticamente significante entre pacientes com e sem fenótipos aberrantes, em relação aos parâmetros hematológicos e resposta ao tratamento. CONCLUSÃO: Esta pesquisa demonstra elevada frequência de casos de LMA M0 em adultos, bem como das LLA-T em crianças no Maranhão, sugerindo que podem haver diferenças na incidência dos subtipos das LMA, assim como dos subtipos de LLA, em diferentes regiões do Brasil. Não foi encontrada associação entre a expres de fenótipos aberrantes e fatores prognósticos em crianças com LLA.

Avaliação do Programa Nacional de Triagem Neonatal para Hemoglobinopatias / Assessment of National Neonatal Screening Program for Hemoglobinopathies

As hemoglobinopatias representam grave problema de saúde pública em virtude de alta freqüência e pelas consequências fisiopatogênicas. No presente estudo foi avaliado o Programa Nacional de Triagem Neonatal para hemoglobinopatias no Maranhão no ano de 2008. Utilizando-se relatórios obtidos do serviço de referência e Secretaria de Saúde do Estado, foram analisados os dados da implantação do programa em todos os municípios maranhenses, bem como a consonância com o Ministério da Saúde quanto aos recursos humanos e divulgação do serviço. Na coleta das amostras, 60,4% das crianças tinham entre oito dias a um mês de idade. O tempo médio entre a coleta e o recebimento da amostra foi de 37 dias. Foram realizados 99.498 testes para hemoglobinopatias, dos quais 4,8%apresentaram perfis alterados. A alteração mais frequente foi o traço falciforme (1/25,4). A coberturado programa foi de 81,57%. Conclui-se que há necessidade de melhorias no serviço de triagem quanto aos indicadores de gerenciamento, bem como maior atenção no diagnóstico e intervenção precoce das doenças hemoglobínicas que apresentam alta frequência no Maranhão.

Relationship of mammalian erythrocyte enzymesand their intermediary compounds among selected animals / Correlação of enzimas eritrocitárias e seus compostos intermediários de mamíferos selecionados

As there are few comparative studies on mammalian red cell metabolism, it was decided to study the glycolytic enzyme activities aswell as related ones, and the metabolites adenosine-5´-triphosphate(ATP) and 2,3-bisphosphoglycerate (2,3-BPG). Mammalia representatives from Primates, Rodentia, Carnivora, Lagomorpha,Artyodactyla, Didelphimorphia and Xenarthra orders, obtained from Fundação Parque Zoológico de São Paulo and Centro de Bioterismoda Faculdade de Medicina da USP, were studied. The blood was collectedin EDTA and ACD, the red cells were washed in saline at 4o C, lysed1:20 in hemolysing solution by freeze-and-thaw, and the followingenzymes were assayed according to standard procedures: hexokinase,glucose-6-phosphate isomerase, phosphofructokinase, aldolase, triosephosphate isomerase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,phosphoglycerate kinase, monophosphoglycerate mutase, enolase,pyruvate kinase, lactate dehydrogenase, as well as 2,3-bisphosphoglycerate mutase, glucose-6-phosphate dehydrogenase,6-phosphogluconate dehydrogenase activities at 37oC , and adenosine-5´-triphosphate and 2,3-bisphophoglycerate concentrations. Are markable variation among the studied species was observed.However, it was detected a significant positive correlation between the adenosine-5´-triphosphate concentrations and triose phosphate isomerase and 2,3-bisphosphoglycerate mutase activities, as well assignificant positive correlation between 2,3-bisphosphoglycerate concentration and 2,3-bisphosphoglycerate mutase activity in all studied species as a whole. Most of studied species exhibited a steady ATP concentration range between 4 and 6 μ moles.g Hb –1 except the Artiodactyla (Cervus elaphus) and Carnivora (Panthera leo, Leoparduspardalis, Canis Lupus and Chrysocyon brachyurus,) which presented values between 2 and 3 μ moles g Hb –1. However, the 2,3-BPG concentration showed remarkable variation among the studied ...

Como há poucos estudos comparativos sobre o metabolismo eritrócitário dos mamíferos propôs-se estudar as atividades das enzimas glicolíticas, anexas e os metabólitos adenosina-5’-trifosfato e2,3-difosfoglicerato. Foram estudados mamíferos das ordens Primata,Rodentia, Carnivora, Lagomorpha, Artiodactyla, Didelphimorphia eXenarthra oriundos da Fundação Parque Zoológico de São Paulo e Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP. O sangue foicolhido em EDTA e ACD, os eritrócitos foram lavados em soluçãofisiológica a 4o C e hemolisados em solução hemolisante 1:20 porcongelamento e descongelamento e as atividades das seguintes enzimasforam determinadas de acordo com procedimentos padronizados:hexoquinase, glicose-6-fosfato isomerase , fosfofrutoquinase, aldolase,triose fosfato isomerase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase,fosfoglicerato quinase, 2,3-difosfoglicerato mutase,monofosfogliceromutase, enolase, piruvato quinase, lactatodesidrogenase, bem como a glicose-6-fosfato desidrogenase, 6-fosfogluconato desidrogenase a 37ºC e os metabólitos intermediários2,3-difosfoglicerato e adenosina-5’-trifosfato. As enzimas e os compostos intermediários estudados apresentaram grande variabilidade entre as espécies de mamíferos estudadas. Foi observada correlação positiva entre a atividade da triose fosfato isomerase e a 2,3-difosfoglicerato mutase e os teores de adenosina-5’-trifosfato das espécies, bem como correlação positiva entre a 2,3-difosfogliceratomutase em relação ao 2,3-difosfoglicerato. Os teores de adenosina-5’-trifosfato mantiveram-se dentro de uma faixa estável, ao redor de 4 a6 μ moles / gHb, com as exceções das espécies das ordens Carnivora(Panthera leo, Leopardus pardalis, Canis lupus and Chrysocyonbrachyurus) e Artiodactyla (Cervus elaphus), que exibiram 2 a 3 μmoles / g Hb. Já os valores da concentração de 2,3-difosfoglicerato apresentaram, por sua vez, variação considerável entre as..

Riboflavin deficiency in pregnant womem in a public institution of São Paulo city, SP, Brasil

vitamin doses were given and in women who did not receive any vitamin supplementation during gestation. Riboflavin nutritional determination was assessed by means of glutathione reductase activation coefficient (GR-AC), and the value higher than 1.5 was considered as indicative of riboflavin deficiency. The pregnant women were divided into four groups: 123 pregnant women to whom any vitamin supplementation were not given, 25 who daily received 2.5 to 3.5mg of riboflavin, 53 who were daily supplemented with 1.0 to 1.7mg of riboflavin, and 22 to whom were daily given <0.85mg of riboflavin. The women group daily supplemented with 2.5 to 3.5mg riboflavin showed the lowest riboflavin deficiency, and the other groups (64.5%) presented vitamin deficiency with GR-AC higher than 1.5. These data suggest that the vitamin concentrations found in the commercially available vitamin supplemented – preparations, as well as those found in ingested food were insufficient to provide a good nutritional status for pregnant women. These findings strongly suggest that riboflavin deficiency has in fact been a relevant public health problem in São Paulo city.

Neste estudo prospectivo foi avaliado o estado nutricional em riboflavina nas parturientes que faziam uso da suplementação vitamínica de variadas concentrações de riboflavina, bem como naquelas que não fizeram uso de qualquer suplementação durante o período gestacional. O recurso utilizado para a avaliação nutricional foi a determinação do coeficiente de ativação da glutationa redutase (CA-GRE). Os valores de CA-GRE acima de 1,5 foram considerados como indicativos de deficiência de riboflavina. Foram analisados quatro grupos de gestantes: 123 parturientes sem suplementação vitamínica; 25 que utilizaram formulação contendo de 2,5 a 3,5mg de riboflavina; 63 parturientes que utilizaram fármacos contendo 1,0 a 1,7mg de riboflavina e o quarto grupo constituído de 22 mulheres que receberam formulação contendo < 0,85mg de riboflavina. O grupo de parturientes que apresentou menor índice de deficiência de riboflavina foi aquele que fez o uso da suplementação vitamínica com as taxas entre 2,5 a 3,5mg de vitamina B2. Os demais grupos, com a inclusão daquele que não complementou a dieta com suplementação vitamínica, apresentaram índices de deficiências bem maiores. Esses achados indicam que as quantidades de riboflavina apresentadas nesses fármacos, bem como na dieta alimentar, foram insuficientes para atingir níveis bioquímicos semelhantes ao do grupo controle. No geral, foi encontrada uma incidência de deficiência de riboflavina de 64,4%, o que permite sugerir que a arriboflavinose é um importante problema de Saúde Pública na cidade de São Paulo.

A novel 3-base deletion (IVS3+2_4delTGG) of the hydroxymethylbilane synthase gene in a Brazilian patient with acute intermittent porphyria

Acute intermittent porphyria (AIP, OMIM 176000) is an autosomal dominant metabolic disease caused by mutations in the gene encoding hydroxymethylbilane synthase (HMBS; EC 4.3.1.8; formely named porphobilinogen deaminase, PBGD), mapped to chromosome 11q23.3. We describe a novel mutation of the HMBS gene, a de novo 3-base deletion in the splicing donor site of intron 3 (IVS3+2_4delTGG) in a woman affected by AIP. RT-PCR analysis revealed an abnormal HMBS mRNA, compatible with exon 3 skipping.

Red cell aspartate aminotransferase saturation with oral pyridoxine intake

CONTEXTO E OBJETIVO: A enzima aspartato aminotransferase apresenta o piridoxal fosfato como coenzima, oriunda da piridoxina existente em alimentos vegetais frescos. A anemia sideroblástica responsiva à vitamina B6, mielofibrose e síndrome de Peyronie respondem a altas doses de piridoxina. O objetivo foi investigar a máxima resposta da aspartato aminotransferase à suplementação oral com piridoxina. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Experimento controlado, na Seção de Hematologia, Instituto Adolfo Lutz. MÉTODOS: A atividade da aspartato aminotransferase eritrocitária foi determinada (antes e após) em voluntários que receberam suplementação por 15-18 dias (30 mg, 100 mg e 200 mg diariamente). Estudo in vitro também foi realizado, com sangue de sete indivíduos. As atividades enzimáticas antes e após a incubação foram determinadas, seguindo o mesmo protocolo do estudo in vivo. RESULTADOS: O estudo in vivo revelou um aumento gradativo da saturação da aspartato aminotransferase com doses crescentes de piridoxina. 83% de saturação foi alcançada com 30 mg diariamente, 88% com 100 mg e 93% com 200 mg. O estudo in vitro não revelou saturação de 100%.CONCLUSÕES: Tanto in vivo quanto in vitro, não se revelou saturação completa da aspartato aminotransferase por sua coenzima piridoxal-5-fosfato nos eritrócitos. Entretanto, a dose de 200 mg diariamente poderia ser empregada com segurança no tratamento da anemia sideroblástica, mielofibrose e síndrome de Peyronie. Embora a saturação máxima nos eritrócitos não seja atingida, os eritroblastos e outras células nucleadas que contenham as organelas citoplasmáticas certamente atingirão a saturação completa, possivelmente à razão dos resultados obtidos nas doenças citadas.

Caracterização molecular dos genes das variantes da glicose-6-fosfato desidrogenase Gd+ Cuiabá e Gd+ Butantan / Molecular characterization of gene of glucose-6-phosphate dehydrogenase variants Gd+ Cuiabá and Gd+ Butantan

Estudos prévios demonstraram alterações bioquímicas em duas variantes da glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) com atividade enzimática normal (classe 4), a Gd+ Cuiabá e Butantan. Na Gd+ Cuiabá o Km era elevado para G6P e para Gd+ Butantan o Km era elevado para G6P e NADP. Este trabalho teve por objetivo caracterizar molecularmente tais variantes. Propôs-se iniciadores que flanqueassem regiões menores, e que foram otimizados para as reações da PCR para SSCP e sequenciamento do DNA genômico e região promotora, para RFLP na determinação dos haplótipos, e para sequenciamento do RNA e sua expressão pela PCR em Tempo Real. Utilizou-se como parâmetro para os haplótipos e para otimização destas reações, 30 amostras deficientes e 32 controles normais GdB+...

The absolute recommendation of chamber Neubauer method for platelets counting instead of indirect methods in severe thrombocytopenic patients

Accurate and precise platelet counting is crucial for recommending platelets transfusion for thrombocytopenic patients, principally when platelet counts are bellow 30,000/µl. As most laboratories still use the indirect methods for confirming low automated platelet counts, this work compared two indirect methods used in practice (Fonio and Nosanchunk et al.) with the International Committee for Standardization in Hematology recommended direct method (Brecher and Cronkite). The obtained data show that the indirect methods present low precision and accuracy, and that the direct method should always be employed in severe thrombocytopenic samples thanks to its high precision

Is automated platelet counting still a problem in thrombocytopenic blood?

CONTEXT: Reliable platelet counting is crucial for indicating prophylactic platelet transfusion in thrombocytopenic patients. OBJECTIVE: To evaluate the precision and accuracy of platelet counting for thrombocytopenic patients, using four different automated counters in comparison with the Brecher & Cronkite reference method recommended by the International Committee for Standardization in Hematology (ICSH). TYPE OF STUDY: Automated platelet counting assessment in thrombocytopenic patients. SETTING: Hematology Laboratory, Hospital do Servidor Público Estadual de Säo Paulo, and the Hematology Division of Instituto Adolfo Lutz, Säo Paulo, SP, Brazil. MAIN MEASUREMENTS: Brecher & Cronkite reference method and four different automated platelet counters. PARTICIPANTS: 43 thrombocytopenic patients with platelet counts of less than 30,000/æl RESULTS: The ADVIA-120 (Bayer), Coulter STKS, H1 System (Technicom-Bayer) and Coulter T-890 automatic instruments presented great precision and accuracy in relation to laboratory thrombocytopenic samples obtained by diluting blood from normal donors. However, when thrombocytopenic patients were investigated, all the counters except ADVIA (which is based on volume and refraction index) showed low accuracy when compared to the Brecher & Cronkite reference method (ICSH). The ADVIA counter showed high correlation (r = 0.947). However, all counters showed flags in thrombocytopenic samples. CONCLUSION: The Brecher & Cronkite reference method should always be indicated in thrombocytopenic patients for platelet counts below 30,000 plt /µl obtained in one dimensional counters

Red cell glutathione reductase saturation obtained with oral riboflavin supplementation

The erythrocyte glutathione reductase (E-GR) saturation with its coenzyme flavin adenine dinucleotide (FAD) affords the nutritional status regarding the vitamin B2, as FAD proceeds from riboflavin intake. E-GR normally exhibits physiological partial saturation with its coenzyme. OBJECTIVE: To study the maximum in vivo saturation which could be reached by increasingly oral vitamin supplemetantion. METHODS: Three groups of normal volunteers were given 3 mg (group A), 20 mg ( group B) and 50 mg (group C) riboflavin daily during twenty days. The enzyme activities were assayed before and after supplementation, with and without coenzyme addition to the reagent system. RESULTS: 77 per cent, 83 per cent and 87 per cent saturation were observed in the groups A, B and C respectively. CONCLUSION: Increasing in vivo saturation was observed with increasing oral doses of riboflavin supplementation, but total saturation was not observed even with the highest oral 50 mg roboflavin supplementation